歐盟Sanco 10597/2003最新版中第二階段Tier II原藥等同性評審資料要求要點如下：

1. 對于新雜質或超標雜質≥0.1% – <1%：只需要艾姆斯Ames實驗；

2. 對于新雜質或超標雜質≥1%：需要3種體外遺傳毒理實驗,并且根據情況考慮以下實驗：

a) 急性經口毒性Acute oral;

b) 皮膚致敏性Sensitization;

c) 發育毒性Developmental study;

d) 神經毒性Neurotoxicity study;

3. 對于新雜質或超標雜質≥5%：考慮28天或90天重復劑量橋實驗或其它實驗。

聯合國糧農組織FAO

FAO農藥標準手冊中原藥等同性評審Tier II資料要求于2018年進行了修訂,主要內容如下：

• 隨著新的OECD測試指南和GHS分類的實施,急性經口和經皮實驗通常會給出范圍而不是數字的結果。在這種情況下,參考產品和新來源原藥之間的急性毒性值的比較可能不適用。例如,如果參考產品急性經口致死中量LD50為87mg/kg bw,而新來源原藥 LD50為50-300mg/kgbw,則無法進行比較。

• 如果某雜質不引起急性或短期毒性,在實驗中該雜質可能會被忽略。例如,氟啶胺雜質5的神經毒性只在28天或90天的實驗中出現；

• 因此,Tier II毒理學等同資料要求修改如下：

1. 艾姆斯Ames study；

2. 考慮眼睛刺激性、皮膚刺激性、皮膚致敏性、28天或90天重復劑量實驗；

3. 除Ames外的其他遺傳毒性；

4. 并考慮繁殖、發育、致癌性、神經毒性等；

巴西Brazil

巴西衛生部RDC 294/2019 原藥等同性評審Tier II資料要求的要點如下

1). 對于新雜質或超標雜質 ≥0.1% – 1%：考慮3項體外遺傳毒理實驗

1. Ames;

2. 體外哺乳動物細胞基因突變實驗Gene mutation study in vitro inmammalian cells; 以及

3. 體外哺乳動物細胞染色體損傷實驗Chromosomal damage study in vitro inmammalian cells

2). 對于新雜質或超標雜質≥1%：考慮如下實驗

1. Ames;

2. 體外哺乳動物細胞基因突變實驗Gene mutation study in vitro inmammalian cells;

3. 體外哺乳動物細胞染色體損傷實驗Chromosomal damage study in vitro inmammalian cells;

4. 體內體細胞染色體損傷實驗In vivo chromosomal damage study insomatic cells;

5. 急性經口毒性實驗Acute oral toxicity study;

6. 眼睛腐蝕/刺激性實驗Eye corrosion/irritation study;

7. 腐蝕/皮膚刺激性實驗Corrosion/Skin irritation Study; 以及

8. 皮膚和呼吸道致敏實驗Skin and respiratory sensitization study

總結及建議：

歐盟Sanco 10597 要求在出現新雜質或超標雜質≥1% 時進行3項體外遺傳毒性實驗,而巴西的RDC 294要求在新雜質或超標雜質≥0.1 – 1%時進行。3項體外遺傳毒性實驗是否應自動觸發或根據指定的雜質情況考慮按需要進行是可以討論的,最終由巴西登記機關當局決定；

推薦以下3種方案來安排原藥等同性登記所需的毒理學實驗：

首先需要重新考慮所謂的傳統急毒6項+致突變2項(Ames和體內微核)實驗,已經不再適用于目前原藥等同性評審第二階段的毒性資料要求。

基于登記提交者/原藥工廠對于擬申請原藥等同性評審的產品其生產工藝/雜質情況的了解程度,毒理實驗的安排可以考慮以下三種方案：

1. 先完成Tier I 評估并根據評審結果給出了Tier II 毒理學數據要求時再去安排毒理學實驗。評估會出現兩種結果：1.化學等同順利通過,不需要提交毒理資料；2.化學不等同,需要按照雜質情況補交相應的毒理報告,這時要注意毒理實驗所需的樣品是否有代表性,假如五批次實驗中用過的樣品批次已經過期,毒理實驗新批次樣品需要補做單批次的定性定量雜質分析,以證明該樣品與五批次樣品規格一致。

   
   

2. 做五批次實驗時,同時或隨后安排 3項體外遺傳毒性實驗(用五批次實驗中的某一批樣品)。這種情況適用于已知自家產品可能的新雜質或超標雜質小于1%。此方案能夠滿足歐盟和巴西的登記要求,且不用擔心幾年后才安排毒理實驗時原五批次樣品過期。

   
   

3. 做五批次實驗室時,考慮安排所有相關的毒理學實驗(用五批次實驗中的某一批樣品)。適用于對自家產品不了解或已知會有雜質大于1%的情況,不用擔心幾年后才安排毒理實驗時五批次樣品過期,且能滿足歐盟和巴西的登記要求。

另外,由于很多公司的產品目標市場不僅限于巴西和歐盟,常規6項急毒實驗報告在很多國家都是硬性的登記要求,因此無論選擇以上3種方案中的哪種,都不影響急毒6項實驗在五批次實驗進行時同時安排。因此b方案和c方案的最后區別僅在于是否考慮體內體細胞染色體損傷實驗的安排。